Princip:
Chromatografie je dělící metoda, při níž dochází k oddělování jednotlivých
složek na základně různé rozpustnosti mezi fází stacionární a mobilní
(pohyblivá). V našem případě je stacionární fází silufol=hliníková fólie s vrstvou
silikagelu. Mobilní fází jsou organického rozpouštědla. Kvalitu rozdělení udává
tzv. retardační faktor RF=a/b…(a= vzdálenost skvrny od startu, b=
vzdálenost čela od rozpouštědla)
Pomůcky a chemikálie: mikropipety, kádinky, hodinové skla, fenol,
pyrogalol, hydrochinon, rezorcinol, chlorid železitý v rozprašovači,
rukavice,etanol, amoniak,silufolové kartičky,tužka
Postup: 1) Ustřihneme
potřebný kus fólie Silufol (silikagel se škrobem jako pojivem) naneseme
mikropipetou roztoky jednotlivých fenolů (5-10mm3): 1% ních roztoků
rezorcinolu, fenolu, hydrochinonu a pyrogalolu v etanolu ve formě skvrn o
průměru asi 3mm. Skvrny musí být vzdáleny asi 2cm od dolního okraje a 1,5-2cm
od sebe navzájem.
2) Pak umístíme
fólie do komory nasycené parami rozpouštědla. Jako komoru použijeme kádinku
přikrytou hodinovým sklem.
3) Start s nasycenými látkami nesmí být do
rozpouštědla ponořen.
4) Rozpouštědlo
bude vzlínat a postupně unášet látky od startu.
5)
Čelo
rozpouštědla necháme dojít asi 2cm od horního okraje, fólii vyjmeme, polohu
čela si zaznamenáme a necháme rozpouštědlo odpařit na vzduchu.
6)
Pak
provedeme detekci roztokem chloridu železitého v etanolu, který naneseme rozprašovačem.
7)
Potom
ještě necháme krátce působit páry amoniaku .
8)
Objeví
se žluté až temně hnědé skrvny jednotlivých fenolů a vypočítáme RF.
fenol
|
pyrogalol
|
hydrochinol
|
rezorcinol
|
|
B:A
- 1:1
|
0
|
1
|
1
|
1
|
B:A
– 1:2
|
0
|
1
|
1
|
1
|
B:A
– 2:1
|
0
|
1
|
1
|
1
|
Benzen
|
0
|
2,5
|
1,4
|
3,5
|
Aceton
|
0
|
1
|
1
|
1
|
b=6
RF=
pyrogalol: RF=
0,4167
hydrochinol:RF=
0,2333
rezorcinol:RF=
0,5833
ukázka silufolové kartičky
potřebné pomůcky
nanášení mobilní fáze
silufolové kartičky v komoře s rozpouštědly
vzlínání benzenu
odpaření rozpouštědla
Nanášení chloridu železitého
Vlevo- nevyvzlínaní látky(špatný výsledek)
Vpravo-správně vyvzlínané látky(vzorový výsledek)
Žádné komentáře:
Okomentovat